Co-IP免疫共沉淀

服务介绍：

免疫沉淀是纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，与蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10分钟，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

主要用途：

免疫共沉淀常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合，也可以用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

检测原理：

当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。

服务流程：

1、讨论具体实验方案，接收样本与抗体。

2、预实验确定样本中蛋白表达及抗体效价。

3、正式实验，10-15个工作日内完成，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少相应变化。

4、出具实验报告，提供原始扫描图片。

实验结果：

Co-IP示例图

样本要求及运输条件：

1、客户提供细胞样本：

（1）收集细胞沉淀，细胞数量大于1×10⁷。

     贴壁细胞：用细胞刮将细胞小心刮下来，将细胞悬液1000rpm，离心5分钟。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

     悬浮细胞：细胞悬液1000rpm，离心5分钟。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

（2）每个实验组细胞数量保证大于10⁷，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少，细胞要求数量会相应变化。

（3）干冰运输。

2、客户提供组织样本，新鲜组织：

（1）组织保存完好：保存于-80℃或者液氮。

（2）组织重量要求大于100mg， 根据组织大小、检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少，组织要求数量会相应变化。

（3）组织中血液残留少，应剔除除目的组织以外的部分。

（4）干冰运输。