一、实验器材及试剂

1、实验器材

2、主要试剂及货号

二、实验步骤

1、OCT包埋：新鲜速冻组织不需要固定脱水，根据客户要求将组织修平整用OCT包埋剂包埋后进行切片，速冻组织包埋时用镊子轻轻刮去组织与包埋剂之间的气泡，以免留下空隙导致切片时组织与包埋剂分离；管腔类组织在包埋前要将其在常温下的OCT包埋剂中浸润5-10分钟，目的是让包埋剂填充到管腔里面，避免后期切片时翻片、皱片的情况产生。

2、切片：首先要粗切，粗切一般用40μm左右厚度，将组织粗切快到目的区域时换细切，细切一般厚度在6μm-20μm不等，根据客户开单需求留片，将干净的防脱切片平放于切出的组织片上方可将组织贴于载玻片上，片子于-20℃保存备用。

3、如需固定进行后续染色，将切好的冰切片放于固定液中进行固定10-15分钟，沥干放-20℃保存。

4、如有不能固定的冰切片，片子切完后直接放至-20℃或-80℃保存备用。

三、注意事项

剩余的OCT包埋块组织用包埋剂封住组织切面并于-80℃保存，寄送时用干冰。

固定组织OCT包埋实验报告

一、实验器材及试剂

1、实验器材

2、主要试剂及货号

二、实验步骤

1、固定：新鲜组织固定液固定48h以上，将组织从固定液取出，用手术刀将目的部位组织修平整。

2、脱水：将修切好的组织放于20%的蔗糖溶液内脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内脱水沉底。组织相对大、厚的要换第二次30%蔗糖溶液直至组织沉底，大鼠脑袋相对水分比较多、组织大的建议脱水4-5天最佳，如果组织相对较小，如小鼠血管可直接放入30%蔗糖溶液中脱水，沉底后即可包埋切片。

3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，将组织放在OCT包埋剂中常温浸润5分钟左右，将样本托放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。

4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚度5-10μm，将干净的载玻片平放于切出的组织片上方可将组织贴于载玻片上，切完后-20℃保存。

5、如需固定进行后续染色，将切好的冰切片放于固定液中进行固定10-15分钟，沥干放-20℃保存备用。

三、注意事项

剩余的OCT包埋块组织用包埋剂封住组织切面并于-80℃保存，寄送时用干冰。