实验报告

动物组织透射电镜实验报告

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一、实验器材及试剂

1、实验器材

名称	厂家	型号
超薄切片机	Leica	Leica UC7
钻石切片刀	Daitome	Ultra 45°
透射电子显微镜	HITACHI	HT7700
200 目方华膜铜网	中镜科仪	BZ11262a

2、主要实验试剂

试剂	厂家	货号
电镜固定液	biossci	BP0130
无水乙醇	国药集团化学试剂有限公司	100092183
丙酮	国药集团化学试剂有限公司	10000418
812 包埋剂	SPI	02660-AB
锇酸	Ted Pella Inc	02602-AB
醋酸双氧铀	Ted Pella Inc	02624-AB

二、透射电镜制片步骤

1、取材固定：新鲜组织确定取材部位，尽量减小牵拉、挫伤与挤压等机械损伤，1-3min 内取样，取样组织 1mm3 大小。取材前可提前准备装有电镜固定液的培养皿，将小组织块离体取下后立即投入培养皿内，用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成 1mm3 的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的电镜固定液的 EP 管内继续固定，4℃固定保存及运输。0.1M 磷酸缓冲液 PB（PH7.4）漂洗 3 次，每次 10min。

2、后固定：0.1M 磷酸缓冲液 PB（PH7.4）配制的 1%锇酸避光室温固定 2h。0.1M 磷酸缓冲液 PB（PH7.4）漂洗 3 次，每次 15min。

3、室温脱水：组织依次入 30%-50%-70%-80%-95%-100%-100%酒精上行脱水每次 10min，100%丙酮两次，每次 10min。

4、 渗透包埋：丙酮︰812 包埋剂=1︰1， 37℃ 2-4h，丙酮︰812 包埋剂=1︰2 ，37℃渗透过夜，纯 812 包埋剂 37℃ 5-8h。将纯 812 包埋剂倒入包埋板，将样品插入包埋板后 37℃烤箱过夜。

5、 聚合：包埋板放于 60℃烤箱聚合 48h，取出树脂块备用。

6、 超薄切片：树脂块于超薄切片机 70nm 超薄切片，200 目方华膜铜网捞片。

7、染色：铜网于 2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色 15min；超纯水清洗3 次；枸橼酸铅溶液避二氧化碳染色 10min；超纯水清洗 3 次，滤纸稍吸干。铜网切片放入铜网盒内室温干燥过夜。

8、透射电子显微镜下观察

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