抗酸染色实验报告

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1、环保脱蜡剂脱蜡，切片脱蜡后不经酒精，将切片周围余液吸干，并待余液完全挥发干后，用流水冲洗至无肉眼可见油状物附着。

2、滴加石碳酸复红溶液于切片上，室温染色10-15分钟；或用微火加热至冒蒸汽后停止加热，染色5-10分钟（注意：加热时间不宜过长，否则菌体浓染不利于观察）。

3、水洗，将水分沥干或以滤纸吸干。

4、滴加酸性酒精溶液脱色1-2分钟。

5、水洗（若切片上还有红色残存，则滴加酸性酒精溶液作用至红色消失为止，然后继续水洗）。

6、加亚甲基蓝溶液染20-30秒，水洗。

7、切片水分以滤纸吸干或吹干，中性树胶封固。

8、显微镜下镜检，图像采集分析。

在淡蓝色背景下，抗酸性菌（如：结核杆菌、麻风杆菌、分枝杆菌）呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色。外观：石碳酸复红溶液呈红色，酸性酒精溶液呈无色透明，亚甲基蓝溶液呈蓝色。

结核分枝杆菌多数为杆状、稍弯曲；菌体宽度0.3-0.6μm；菌体长度不一，在0.5-8μm之间，多数为1.5-3.5μm，少数菌体较长者可呈螺旋状；染色良好的结核分枝杆菌菌体内，能够发现着色较深的异染颗粒。

1、涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡

2、细胞核如果着色太深，可以再次分化。

3、酸性酒精溶液用完后，可自制5％盐酸酒精溶液（5ml浓盐酸与95ml 95%酒精混合）作为脱色液。

4、在同一个抗酸菌菌体上，有时会出现红色深浅不一的情况，观察时应予注意。

5、组织切片脱蜡时切忌使用二甲苯，脱蜡后不经酒精，避免高浓度酒精破坏菌体内的脂质。

6、亚甲基蓝溶液复染颜色不宜过深，否则易影响阳性菌的观察。

7、冬季室温过低时，染色时间应适当延长。