普鲁士蓝+DAB增强型染色实验报告

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1、组织石蜡包埋切成 3-7um 的切片

2、切片常规脱蜡至水。试剂盒从冰箱取出复温 20min 至室温（25-30℃），湿盒注水置于 37℃恒温箱预热 20min。

3、按照 1：1 的比例配置 Perls 染色工作液，滴加到切片上至完全覆盖组织，置于湿盒内 37℃孵育 20min。

4、取出切片，蒸馏水轻轻冲洗三次，每次 10s，按照 1：9 配置孵育工作液。

5、切片滴加孵育工作液至完全覆盖组织，置于湿盒内 37℃孵育 10-20min。（建注意事项 4）

6、取出切片，1*PBS 轻轻浸洗三次，每次 60s，按照 19：1 的比例配置增强工作液。

7、切片滴加增强工作液至完全覆盖组织，置于湿盒内 37℃孵育 10-20min。（见注意事项 5）

8、取出切片，1*PBS 轻轻浸洗三次，每次 5s，滴加复染液染色 3-5min。

9、蒸馏水浸洗 10min。

10、梯度乙醇脱水，透明，环保封片剂封片。

11、染色结果判读：常规细胞核红紫色到蓝色，阳性细胞黄棕色到黄褐色，胞质浅紫色或无色

1、收到试剂盒之后建议将试剂(C1)取出，按照单次使用量分装或直接放置-20℃冰箱保存，剩余试剂盒放置 2-8℃冰箱保存。

2、避免使用酸性固定液处理组织，铬酸盐处理也会影响铁的存在。

3、所有工作液久置容易失效，建议现用现配，在2小时内使用完毕。

4、孵育工作液孵育时间建议参考组织大小和细胞密度进行适当调整。

5、增强工作液处理建议镜下控制着色程度，当阳性细胞着黄棕色到棕黑色时即可。

6、如无法保证 37℃恒温处理可根据室温适当延长或缩短处理时间。