Taqman探针法SNPs分析

服务介绍：

该技术是由ABI研发的SNP分型技术，其技术原理如下：PCR反应时，加入一对两端有不同荧光标记的MGB特异探针来识别不同等位基因（allele1和allele2），5’端为报告荧光基团（reporter），3’端为淬灭荧光基团(quencher)。PCR过程中，两个探针能与正向引物和反向引物之间的互补序列特异退火结合。当探针以完整形式存在时，由于能量共振转移，荧光基团只发出微弱荧光。特异的探针与相应的等位基因结合后，DNA聚合酶发挥5’到3’外切酶活性，把报告荧光基团切割下来，脱离3’端淬灭荧光基团的淬灭作用（quench），从而发出荧光。两个探针的5’端标有不同的荧光（FAM或VIC），3’端标有MGB淬灭基团结合体。根据检测到的不同荧光，可以判断相应样本的SNP等位基因型。

服务流程：

DNA提取及质量检测-引物及探针设计-qPCR扩增-结果分析。

实验结果：

探针法原理及结果示意图

样本要求：

1、DNA样品：浓度≥50ng/μl、体积≥20μl的总DNA样品。

2、血液样品：请提供≥500μl抗凝血；采用标准的采样管，抗凝剂推荐使用EDTA。

3、组织样品：请提供足量的组织样品（≥300mg）。

4、细胞（≥10⁶ ）。

5、PCR产物：提供浓度≥20ng/μl、体积≥20μl（根据具体的实验位点而定）。

6、SNP位点信息：SNP位点的rs号；SNP位点上下游各200bp的确切序列及SNP位点的突变类。