EDU染色（细胞增殖）

服务介绍：

EdU（5-ethynyl-2'-deoxyuridine，5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其乙炔基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应可以高效快速地检测细胞增殖，可以有效地检测处于S期的细胞百分数。

主要用途：

EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样本变性处理，有效地避免了样本损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。

检测原理：

在DNA合成过程中，EdU可取代脱氧胸腺嘧啶核苷（T），插入DNA链中。另一方面，标记的小分子叠氮化物探针通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，反应非常迅速，且合成的DNA会被相应的荧光探针所标记，从而可以用适当的荧光检测设备检测到增殖的细胞。

实验流程：

细胞培养-用EdU孵育样本-细胞固定-EdU检测-DAPI染核-封片-显微镜镜检。

样本要求及运输条件：

1、提供固定合格的样本。组织离体后，选择合适的固定液立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，新鲜标本用合适的容器固定24-48h，大标本固定12h，再切开固定。标本常温（24℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻结冰，固定样本常温运输送样。

2、涂片和爬片必须充分固定，石蜡切片实验前需充分脱蜡。

3、样本需要经EdU孵育处理。

注意事项：

1、建议使用50μM EdU培养基孵育，但可以在预实验时根据细胞类型和实验目的，以一系列浓度（10-100μM）的EdU培养基孵育进行优化，细胞不能太密，一般60%-70%。

2、不同细胞类型之间有一定差异，可以先做一个时间梯度，找出合适的孵育时间。

3、EdU孵育时间>24小时宜采用较低浓度，而EdU孵育时间<45分钟宜采用较高浓度。

4、固定好的细胞不染色，于4℃可存放约1个月。组织切片如暂不检测就不脱蜡。