TUNEL染色(DAB)

价  格¥250.00

货  号BBL-0400

品  牌BIOSSCI

规  格

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服务介绍:

TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)又称脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法,是一种检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA断裂情况的方法,本实验为组织样本的TUNEL(DAB)检测,其原理是荧光素(fluorescein)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的3'-OH末端,并与连接辣根过氧化物酶(HRP,horse-radish peroxidase)的荧光素抗体特异性结合,后又与HRP底物二氨基联苯胺(DAB)反应产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞。此方法适用于组织样本(石蜡切片、冰冻切片)和细胞样本(细胞涂片、细胞爬片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。


主要用途:

检测组织中凋亡细胞数量的多少。


检测原理:

细胞凋亡中染色体DNA的断裂是一个渐进的分阶段过程,染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后,约30%的染色体DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下,在核小体单位之间被随机切断,形成180-200bp核小体DNA多聚体。DNA双键断裂或只要一条链上出现缺口,而产生的一系列DNA的3'-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-OH末端,从而可进行凋亡细胞的检测。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。


实验流程:

石蜡切片脱蜡至水-Proteinase K处理-PBS洗涤-TUNEL Dilution Buffer孵育-TUNEL reaction mixture孵育-PBS洗涤-Converter-POD孵育-PBS洗涤-DAB显色-PBS洗涤-封片-显微镜镜检。

Tunel染色流程.png


样本要求及运输条件:

1、提供固定合格的样本。组织离体后,选择合适的固定液立即固定,固定液的量建议大于组织体积的10-15倍,新鲜标本用合适的容器固定24-48h,大标本固定12h,再切开固定。标本常温(24℃左右)或冷藏(4℃)固定,切勿冷冻结冰,固定样本常温运输送样。

2、涂片和爬片必须充分固定,石蜡切片实验前需充分脱蜡。


注意事项:

1、任何实验方法都存在局限性,根据TUNEL实验的本质问题,公司不能保证结果中凋亡细胞的多少(即假阳性、或偏阴性结果)。每批凋亡染色,公司会提供阳性对照。

2、TUNEL染色建议先做预实验(预实验由客户提供预期高表达的样本,蜡块或切片皆可),确认效果后,再做正式实验,建议将预实验的样本加到正式试验中进行质控。预实验我司可提供免费扫描并放置于服务器(可用网页直接浏览)。预实验结果优先由客户自行确认,预实验和正式实验间隔周期不要太久,建议连续三周内完成。

3、正式实验的趋势我司不做保证。

货号 名称 规格 价格 操作
BBL-0115 组织芯片TUNEL染色(DAB) ¥500.00 查看详情
BBL-0401 TUNEL(DAB)+IHC ¥300.00 查看详情
服务流程