骨组织脱钙实验报告(硝酸快脱)

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一、实验器材及试剂

1、实验器材

名称

厂家

型号

脱水机

常州市中威电子仪器有限公司

TSJ-SD

包埋机

常州市中威电子仪器有限公司

BMJ-A

组织包埋框

福建启盛实验设备科技有限公司

58444

石蜡

广东大川特种蜡有限公司


病理切片机

赛默飞世尔科技有限公司

SHANDON FINESSE 325

冻台

武汉俊杰电子有限公司

JB-L5

组织摊片机

常州市中威电子仪器有限公司

PHY-Ⅲ

防脱载玻片

湖北百奥斯生物科技有限公司

BP0510

搅拌机

大龙兴创实验仪器(北京)股份公司OS20-Pro

分析天平

上海瑶新电子科技有限公司

LQ-A20002


2、主要试剂及货号

名称

厂家

型号

硝酸

国药集团化学试剂有限公司

10014528


二、石蜡切片制作

1、取材:将新鲜组织用固定液固定24h以上。固定完成后,将固定液从装有组织的EP管中倒出,然后向EP管内倒满配制好的脱钙液,密封,进行脱钙。

2、脱钙:将脱钙的组织贴好标示,温度一般控制在25℃至30℃之间,用5%-10%硝酸水溶液,厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时,脱钙时管盖不得盖紧,如果是动物类的骨头脱钙时间要缩短,大约3小时检验一次,用小针头刺骨组织(非目的区),轻松可扎过去,说明脱钙已彻底。脱钙完成后需用流水冲洗或浸泡数小时,也可用70%酒精去除酸,脱钙时间必须仔细控制,防止过度脱钙损害组织。

3、脱水浸蜡:将软化好的骨组织取出,放入对应编号的包埋框内,用流水冲洗后,放入脱水机内依次梯度酒精进行脱水与浸蜡。

4、包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋底模内, 待底模内的蜡稍凝固,将组织从包埋框内取出,按照包埋面的要求放入包埋底模, 用镊子底部轻压组织,使组织完全平整的在底模内。将对应编号的包埋框盖在装有组织的底模上,轻轻移至-20℃冻台冷却,待蜡凝固后,将蜡块从底模中取出并修整蜡块。

5、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机切片,厚4μm。切片漂浮于摊片机42℃ 温水上将组织展平,用载玻片将组织垂直捞起,待组织上的水稍沥干后,放入60℃烤片机内烤片,烤片时间为2小时,待水烤干蜡烤化后,取出常温保存备用。


三、注意事项

不可用针刺目的区,针头要小,如骨组织有皮肤、肌肉粘附,可在脱钙前进行剥离。