骨组织脱钙实验报告（硝酸快脱）

一、实验器材及试剂

1、实验器材

2、主要试剂及货号

二、石蜡切片制作

1、取材：将新鲜组织用固定液固定24h以上。固定完成后，将固定液从装有组织的EP管中倒出，然后向EP管内倒满配制好的脱钙液，密封，进行脱钙。

2、脱钙：将脱钙的组织贴好标示，温度一般控制在25℃至30℃之间，用5%-10%硝酸水溶液，厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时，脱钙时管盖不得盖紧，如果是动物类的骨头脱钙时间要缩短，大约3小时检验一次，用小针头刺骨组织（非目的区），轻松可扎过去，说明脱钙已彻底。脱钙完成后需用流水冲洗或浸泡数小时，也可用70%酒精去除酸，脱钙时间必须仔细控制，防止过度脱钙损害组织。

3、脱水浸蜡：将软化好的骨组织取出，放入对应编号的包埋框内，用流水冲洗后，放入脱水机内依次梯度酒精进行脱水与浸蜡。

4、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋底模内， 待底模内的蜡稍凝固，将组织从包埋框内取出，按照包埋面的要求放入包埋底模， 用镊子底部轻压组织，使组织完全平整的在底模内。将对应编号的包埋框盖在装有组织的底模上，轻轻移至-20℃冻台冷却，待蜡凝固后，将蜡块从底模中取出并修整蜡块。

5、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机切片，厚4μm。切片漂浮于摊片机42℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织垂直捞起，待组织上的水稍沥干后，放入60℃烤片机内烤片，烤片时间为2小时，待水烤干蜡烤化后，取出常温保存备用。

三、注意事项

不可用针刺目的区，针头要小，如骨组织有皮肤、肌肉粘附，可在脱钙前进行剥离。