基因组DNA提取实验报告

一、实验器材及试剂

1、实验器材

2、主要试剂及货号

二、实验步骤

1、动物组织处理：：取约25 mg动物组织用液氮研磨成粉末加到1.5 mL离心管中，加入180 µl Buffer ACL，再加入20 µl Proteinase K溶液，震荡混匀。56°C水浴至细胞完全裂解。在水浴后加入 20 µl RNase A（10 mg/mL），室温放置 2-5 min。

2、贴壁培养细胞：弃尽培养液，每10 cm2细胞加入200 µl Buffer PBS和20 µl Proteinase K，轻轻晃动培养瓶，收集细胞转移至新的离心管中，再加入200 µl Buffer CL，震荡混匀，56°C水浴10 min。在水浴后加入 20 µl RNase A（10 mg/mL），室温放置 2-5 min。继续步骤3~8。

3、悬浮培养细胞：收集细胞，离心去除培养液，加入200 µl Buffer PBS和20 µl Proteinase K，混匀。再加入200 µl Buffer CL，震荡混匀，56°C水浴10 min。在水浴后加入 20 µl RNase A（10 mg/mL），室温放置 2-5 min。继续步骤3~8。

4、加入200 µl Buffer CL，充分颠倒混匀。加入 Buffer CL 后，如有沉淀产生，可 70°C 水浴 10 min。

5、 加入200 µl的无水乙醇，充分颠倒混匀。加入无水乙醇后可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响 DNA 的提取和应用。

6、将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2 min，再10,000 rpm室温离心1 min，倒掉收集管中废液。

7、将吸附柱放回收集管中，向吸附柱中加入500 µl CW1 Solution，10,000 rpm离心30 s，倒掉收集管废液。使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。

8、将吸附柱放回收集管中，向吸附柱中加入500 µl CW2 Solution，10,000 rpm离心30 s，倒掉收集管废液。使用前注意溶液中是否按比例加入无水乙醇。

9、将吸附柱重新放回收集管中，于12,000 rpm室温离心2 min，离去残留的CW2 Solution。将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的 CW2 Solution，CW2 Solution 的残留会影响基因组 DNA 的产量和后续的实验。

10、取出吸附柱，放入一个新的1.5 mL离心管中，加入50-200 µl CE Buffer静置3 min，12,000 rpm室温离心2 min，收集DNA溶液。提取的DNA琼脂糖电泳检测，主带清晰无明显降解可立即进行下一步实验或-20°C保存。