β-半乳糖苷酶染色

服务介绍：

细胞衰老β-半乳糖苷酶染色（Senescence β-Galactosidase Staining）是一种基于衰老时衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase; SA-β-Gal）活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的方法。在普通光学显微镜下就可以观测到细胞或组织衰老情况。本实验可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于冰冻切片的衰老检测。

检测原理：

绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老（senescence）状态。此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大的改变。衰老的细胞不能在一些常规刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞通常体积变大，并表达在pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化（aging）的一种潜在原因。

主要用途：

主要用于衰老细胞的染色。

结果判读：

衰老细胞呈深蓝色，细胞核呈红色。

实验流程：

复温-固定-PBS洗涤-染色工作液孵育-染核-封片-镜检。

样本要求及运输条件：

1、新鲜组织干冰运输，细胞爬片需用专用固定液固定。

2、切完且固定后的冰冻切片-20℃运输。

注意事项：

1、X-Gal溶液需室温完全解冻混匀后再使用。

2、β-半乳糖苷酶染色液A和B需提前恢复至室温后再使用，配制好的染色工作液需充分混匀无沉淀方可使用。

3、衰老细胞β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在CO2培养箱中进行孵育显色，否则会影响染色工作液的pH，导致染色失败。

4、配制染色工作液时请选择聚丙烯（PP）或玻璃材质的耗材，不能用聚苯乙烯（PS）材质的耗材。

5、在显色2 h-过夜期间需多次观察显色情况，时间过短可能导致阴性结果；时间太长则可能导致假阳性。显色时间与样本本身所含的β-半乳糖苷酶量多少有密切关系。

6、在配制染色工作液前，需检查染色液A的pH值，如果不是6.0（可能因保存条件导致pH发生改变），需用HCl或NaOH调节pH至6.0再使用。

7、组织切片的β-半乳糖苷酶染色，对于样本的前期准备要求较高，样本需-80℃保存，并尽快完成检测。因为β-半乳糖苷酶非常容易失活，样本保存不当或时间过久，都可能导致酶失活，则染色时没有阳性。

8、操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。