扫描电镜

服务介绍：

扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）利用电子和物质的相互作用，可以获取被测样品本身的各种物理、化学性质的信息，如形貌、组成、晶体结构、电子结构和内部电场或磁场等等。扫描电子显微镜对二次电子、背散射电子的采集，可直接利用样品表面材料的物质性能进行微观成像，可得到有关物质微观形貌的信息。扫描电镜有较高的放大倍数，20-20万倍之间连续可调；有很大的景深，视野大，成像富有立体感，可直接观察各种试样凹凸不平表面的细微结构；试样制备简单，不含水的样本可以不用固定。

主要用途：

1、三维形貌的观察和分析。

2、观察形貌的同时，进行微区的成分分析。

主要设备及参数：

1、平台主要设备：扫描电镜 tescan，VEGA 3 LMU。

2、扫描电镜 tescan，VEGA 3 LMU 主要技术指标：

（1）二次电子分辨率：高真空（二次电子3.0nm at 30kV，8.0nm at 3kV）、低真空（低真空二次电子）：3.5nm at 30kV。

（2）放大倍数：2.5-1000,000。

（3）加速电压：0.2-30kV。

检测原理：

扫描电子显微镜电子枪发射出的电子束经过聚焦后汇聚成点光源；点光源在加速电压下形成高能电子束；高能电子束经由两个电磁透镜被聚焦成直径微小的光点，在透过最后一级带有扫描线圈的电磁透镜后，电子束以光栅状扫描的方式逐点轰击到样品表面，同时激发出不同深度的电子信号。此时，电子信号会被样品上方不同信号接收器的探头接收，通过放大器同步传送到电脑显示屏，形成实时成像记录。由入射电子轰击样品表面激发出来的电子信号有：俄歇电子（Au E）、二次电子（SE）、背散射电子（BSE）、X射线（特征X射线、连续X射线）、阴极荧光（CL）、吸收电子（AE）和透射电子。每种电子信号的用途因作用深度而异。

服务流程：

1、接受样本。

2、核对编号，沟通切面以及拍照要求。

3、电镜制样。

4、镜下预览观察样本。

5、正式实验拍照。

样本取材要求：

动植物组织取材流程及要求：

1、1-3分钟内取样，组织块不超过3mm²，用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污，毛发等去掉，将需要扫描的面做好标记（如在对面进行剪角处理）。

2、取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。尤其是注意保护扫描面。

3、组织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2小时，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

4、植物样本放入固定液后需抽气沉底。

细胞样本取材流程及要求：

1、贴壁细胞：细胞必须贴壁于盖玻片上制成爬片，细胞弃培养基，用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液室温固定2小时，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

2、悬浮细胞：离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀米粒大小，弃培养基后用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液，细胞必须吹散悬浮于固定液内，室温固定2小时，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

细菌样本取材流程及要求：

1、固体培养基的细菌：细菌必须贴壁于盖玻片上制成爬片，用盖玻片轻轻覆盖在菌落上，在培养箱培养一晚上，第二天轻轻揭下来，放入固定液中室温固定2小时，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

2、悬浮细菌孢子等：离心收集细菌要肉眼可见细菌沉淀芝麻至绿豆大小，弃培养基后用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液，必须吹散悬浮于固定液内，室温固定2小时，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

其他如粉末状、固体材料取材流程及要求：

直接准备干燥的粉剂。带有磁性的金属材料不能做扫描电镜。

实验结果：

材料表面扫描电镜

细胞表面扫描电镜

样本要求及注意事项：

1、客户提供材料要求：

（1）按照标准方法取材固定的实验样本（固定在戊二醛固定液中的样品）。

（2）客户需要提供拍照的参考图或者文献，切面要求，明确拍照区域、要求、拍照标尺。

（3）在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

（4）带有磁性样本不能检测。

（5）非常规样本以及特殊拍照要求，请及时沟通。

2、制备样本时间：

（1）实验室收到样本后，扫描电镜在2-3周（15个工作日）左右拍照。

（2）如果制样过程中遇非人为因素影响，时间会适当延长。

3、实验室拍照交付内容：每个样本采集3个视野，每一个视野拍照2-3个倍数，每个倍数采集1-2张图片，每个样本拍照不超过18张图片；根据拍照的实际情况，实验室会适当调整多拍照片。