该实验原理为通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理,非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶,在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基,在反应完成时被保留。据此设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用甲基化的引物能得到扩增片,则说明该位点存在甲基化。反之,说明被检测的位点不存在甲基化。若两对引物均能得到阳性PCR产物,则说明该片段部分甲基化。该方法能定性分析待测区域甲基化情况。
提取基因组DNA-亚硫酸氢盐处理-纯化DNA-PCR扩增-电泳-数据分析-发送实验报告。
不完全甲基化电泳图
1、动物组织:尽可能新鲜和足量的组织(>50-100mg,至少绿豆大小),保存于-80℃或者液氮。
2、细胞样本:细胞量要求:每个实验组细胞数量保证大于106以上;6孔板70-80%;T25培养瓶70-80%。
3、DNA样本:浓度≥50ng/μl、体积≥50μl的总DNA样品,DNA样品需保证DNA电泳主带清晰且无明显降解。
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