Western blot（Total）

服务介绍：

蛋白质印迹法（免疫印迹实验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质所在分析的细胞或组织中表达情况的信息。

主要用途：

Western blot已广泛应用于检测蛋白水平的表达，能对目的蛋白进行定性和半定量分析，还可以用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续检测分析。同时也应用于抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

检测原理：

Western blot法常规采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物质是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如：硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型极其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

服务流程：

1、接收样本及抗体，实验室可有偿提供常备抗体。

2、提取蛋白，检测样本内参，预实验检测目的蛋白。

3、正式实验，5-10个工作日内完成，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少相应变化。

4、出具实验报告，提供原始扫描图片。

实验结果：

AKT

FOXO1

mTOR

PI3K

p-AKT

p-FOXO1

p-mTOR

p-PI3K

WB图片

WB结果

WB结果

样本要求及运输条件：

可接收的样本包括：提取蛋白样本、细胞样本、组织样本、其他，样本来源为人、大鼠、小鼠。

1、客户提供已经提取样本：

（1）蛋白保存完好：蛋白提取后保存于-80℃或者液氮。

（2）提取过程中加入合适蛋白酶抑制剂。

（3）蛋白采用BCA法测浓度后，浓度范围应该为2-8μg/μl或者更高。

（4）经预实验检测合格后才可进行正式实验。

（5）干冰运输。

2、客户提供细胞样本：

（1）收集细胞沉淀，细胞数量大于1×10⁶。

     贴壁细胞：用细胞刮将细胞小心刮下来，将细胞悬液1000rpm，离心5分钟。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

     悬浮细胞：细胞悬液1000rpm，离心5分钟。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

（2）每个实验组细胞数量保证大于10⁶，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少，细胞要求数量会相应变化。

（3）干冰运输。

3、客户提供组织样本：

（1）组织保存完好：保存于-80℃或者液氮。

（2）组织重量要求大于50mg， 根据组织大小、检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少，组织要求数量会相应变化。

（3）组织中血液残留少，应剔除除目的组织以外的部分。

（4）干冰运输。