革兰氏染色

服务介绍：

革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法，利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。此染色法是由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系，后推广为鉴别细菌种类的重要特性之一，对由细菌感染引起的疾病的临床诊断及治疗有着广泛用途。

检测原理：

通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

主要用途：

革兰氏染色的临床意义在于：

1、鉴别细菌。

2、选择药物。

3、与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素；而内毒素主要是指革兰氏阴性菌胞壁成分中的脂多糖，两者的致病作用不同。

结果判读：

革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。

实验流程：

涂片固定-龙胆紫染色-水洗-碘溶液染色-水洗-脱色液脱色-水洗-沙黄溶液复染-水洗-封片-显微镜镜检。

样本要求及运输条件：

1、提供固定合格的样本。组织离体后，选择合适的固定液立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，新鲜标本用合适的容器固定24-48h，大标本固定12h，再切开固定。标本常温（24℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻结冰，固定样本常温运输送样。

2、石蜡切片常温运输，细菌涂片常温运输。

注意事项：

1、染色时间须视何种标本、涂片厚薄等稍作调整；染妇科白带涂片时应稍延长染色时间（不少于10秒），可获得更好的染色效果。

2、脱色液用完后，可用丙酮作为代用脱色液，脱色时间可稍短。

3、血培养标本涂片染色时，因不同品牌血培养瓶所培养细菌的着色性有差异，如发现阴性菌较难区分，建议沙黄溶液的染色时间延长至60秒，或者使用纯沙黄O溶液（另购）复染，以此增加阴性菌与背景的对比度。

4、试剂贮存时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。 

5、冬季室温过低时，染色时间要适当延长。

6、涂片过厚、脱色时间不足、龙胆紫染色时间过长有可能导致假阳性的结果；细菌涂片热固定过度、细菌培养时间太长、脱色过度等有可能导致假阴性的结果。